Phadiatop過敏原檢驗簡介及臨床應用
發表於 : 週日 7月 25, 2010 11:20 am
http://www.labmed.org.tw/publish02_1.ASP?mno=243
前 言
對於氣喘、過敏性鼻炎、蕁麻疹等等疑似過敏所產生的疾病，首要之務是判定病因是否是由過敏所引起的IgE mediated disease，亦即是要區分病人是否屬於異位性體質(Atopy)。
依據ACAAI ( American Collage of Allergy, Asthma & Immunology) 於2001對Atopy一詞所下的定義：若一個人會在很低劑量的過敏原(通常為蛋白質)刺激下即產生IgE抗體，並且產生諸如氣喘、鼻炎、結膜炎、皮膚炎或蕁麻疹等症狀，即為所謂的Atopy異位性體質。
以往常用以診斷Atopic Disease的工具包括總免疫球蛋白E (Total serum IgE)、皮膚過敏原穿刺試驗(Skin Prick Test，SPT)等等。
總IgE的缺點為與臨床症狀的相關性低，易受各種因素如環境、寄生蟲、藥物等等的干擾，且個人之間的差異相當大，在健康的族群中其濃度分佈往往可以由個位數字至上千kU/L (11,13)，因此用以臨床診斷的準確性僅70%左右(1,3,6)；而皮膚試驗雖然成本低廉，但外在環境的干擾因素太多、操作誤差大、缺乏定量且客觀的測量結果，以及過敏原直接接觸身體，對病患更有相當的風險存在。
以往為了彌補總IgE檢測之不足，有一種方法即是同時檢測總IgE，以及數種疑似病因的過敏原特異性IgE(Anti-allergen Specific IgE)。文獻指出使用此方法做過敏疾病的篩檢，以一次使用15種過敏原的效果最好(1)，但一次檢驗15種過敏原的特異性IgE的成本太高不合效益，且非過敏患者亦需花費15種過敏原檢測的成本，造成醫療資源的浪費。故如何設計一個準確的體外檢驗試劑，能夠以合理的成本提供醫師診斷上的正確參考，一直是一個很重要的課題。
Pharmacia ImmunoCAP檢測原理
瑞典Pharmacia特異性免疫球蛋白試劑及自體免疫抗體試劑在性能及多樣性上均有相當不錯的成績。Pharmacia CAP System所使用的試劑，為十分特別的專利ImmunoCAP設計。一般的ELISA Well是將反應試劑結合在管壁上，故試劑的有效反應表面積並不大，而ImmunoCAP則是將過敏原結合在纖維質構成的海綿狀結構中，利用海綿結構的大表面積，大幅增加過敏原與抗體的結合量，故能有更高的敏感度與更快的反應時間，並且由於纖維質可擠壓的特性，故能更有效地進行清洗的步驟，提高其準確性。與液相(Liquid Phase)的系統相比，固態(Solid Phase)的CAP系統則有較方便的包裝、較簡單的處理過程（不需稀釋，直接上機）以及較佳的穩定性 (9,10) 。
ImmunoCAP的反應原理：當ImmunoCAP表面的過敏原與病人血清中的特異性IgE結合後，洗去未結合的非特異性IgE，之後再加入已被螢光酵素標定的抗IgE抗體。此抗體會與留存在CAP中的特異性IgE結合。洗去未結合的抗IgE抗體後，再加入螢光顯影劑。螢光顯影劑與螢光酵素作用後，量測螢光值。以螢光值來判定特異性IgE的結合量。運用相同的原理，Pharmacia的CAP System中有很多種不同用途的試劑可資運用。其中可以滿足診斷異位性體質以及判別是否為IgE-Mediated Disease之需求的，即為Phadiatop及Phadiatop Infant。
Phadiatop
Phadiatop即是Pharmacia 與Atopy兩字的縮寫，表示此一試劑是特別用以檢測異位性體質Atopy之用。其設計概念為在單一試劑內包含了多種一般常見的吸入性過敏原，只要病患血清中的特異性IgE對這些常見過敏原的任何一種以上有所反應，即會被檢測出來。以此設計相當於一次檢測數十種過敏原，但成本則相對低廉得多。
Phadiatop所使用的IgE Cut-off Value為0.35 kU/L，和總IgE所使用之Cut-off Value (成人150kU/L，兒童依年齡而定)有很大的不同，也不會隨著患者的年齡不同而改變，徒增報告判讀上的困擾。Phadiatop是針對一般性的吸入性過敏原所設計，如Dust Mite、花粉、貓狗之類常見動物之皮毛、黴菌等等。和臨床診斷的結果相比，Phadiatop對呼吸道過敏疾病的專一性和敏感性均在90%上下，故其可完全取代傳統總IgE檢測及皮膚穿刺測試在過敏診斷上的角色，做為第一線的過敏篩檢試劑。
Phadiatop Infant
Phadiatop Infant是Pharmacia CAP System在Phadiatop上市之後數年才推出的產品。由於兒童的過敏進程有所謂的「Allergy March」，亦即一個患有過敏性疾病的嬰兒，在出生後不久常會表現出牛奶等食物過敏的症狀，如腹瀉、腸炎等，且血清中這些食物過敏原的特異性IgE濃度也會偏高；隨年紀增長，則食物特異性IgE會逐漸下降，食物過敏的症狀也會漸漸舒緩，取而代之的則是吸入性過敏原的特異性IgE上昇，以及呼吸道黏膜的過敏症狀出現。
故在四歲以下的嬰幼兒，當有過敏疾病的懷疑時，單獨使用Phadiatop可能會因為此時期病童體內尚未產生抗吸入性過敏原的特異性IgE，故檢測較容易出現偽陰性(7)。以往部分使用者利用Phadiatop合併數種食物特異性IgE檢測來針對嬰幼兒使用，而如今Phadiatop Infant可以達到相同甚至更好的效果。
Phadiatop Infant在設計上大部分沿襲了Phadiatop的配方，所不同之處在於其加入了多種嬰幼兒常見的食物過敏原，例如蛋白、牛奶、大豆、花生、小麥等等，故特別適合用以檢測四歲以下的嬰幼兒是否具有異位性體質。Phadiatop Infant的敏感性約92%，而專一性也有82%左右。
Phadiatop臨床應用
在臨床應用上，凡懷疑症狀為過敏所引起的，例如鼻炎、氣喘、蕁麻疹等，即可視患者年齡進行Phadiatop或Phadiatop Infant檢驗，以判定是否為IgE-mediated之疾病。由於Phdiatop 和Phadiatop Infant的定位為異位性體質的檢測，故其檢驗結果僅為「陽性」或「陰性」的定性檢驗。
當檢驗結果為陰性時，即表示病患不為異位性體質，症狀應該不是受過敏原刺激所引起，此時除施以症狀治療外，亦應考慮病因的其他可能性。而當檢驗結果為陽性時，即表示病患為異位性體質，症狀極有可能是受過敏原刺激所引起。此時除考慮投藥施以症狀治療外，亦可再進一步進行個別的過敏原檢驗，找出可能引起症狀的過敏原，注意加以避免，對病況的改善也大有助益。
結 語
近年來過敏相關疾病大幅增加，在小兒科、婦產科、風免科、胸腔內科、皮膚科、耳鼻喉科及家醫科等等均有數量相當龐大的過敏疾病患者。如何提供病人更好的醫療檢驗品質，協助醫師正確的診斷參考，是我們必須持續努力的目標。在過敏檢驗方面，早期的Skin Prick Test及總IgE檢驗顯然已不能滿足檢驗準確性及安全性的需求，而現今利用Phadiatop及Phadiatop Infant來判定過敏病患的異位性體質，從而協助其找出生活中常遭遇的致病過敏原，一方面可以對症下藥，改善病人的生活品質，一方面又可以減少醫療資源的浪費，相信是過敏檢驗之大勢所趨。
參考文獻
1.Herbert FA, Weimer N, Salkie ML. 1982. RAST and skin test screening in the investigation of asthma. Ann Allergy. 49:311-314.
2.Duc J, Peitrequin R, Pecoud A. 1988. Value of a new screening test for respiratory allergy. Allergy. 43(5):332-337.
3.Gustafsson D, Danielsson D. 1988. In vitro diagnosis of atopic allergy in children. A comparison between total IgE, conventional RAST and a new multi RAST (Phadiatop). Allergy. 43(2):105-108.
4.Wever AM; Wever-Hess J; Kramps JA; Mulder Dzn JD, et al. 1989. The Phadiatop test, a new in-vitro test for inhalation allergy. Ned Tijdschr Geneeskd. 133(2):70-73.
5Dutau G, Bremont F, Hoff M, Nouilhan P, et al. 1990. Detection of respiratory allergies using the Phadiatop test in children 1 to 6 years of age. Ann Pediatr (Paris) 37(6):355-359.
6.Okudaira H, Ito K, Miyamoto T, Wagatsuma Y, et al. 1991. Evaluation of new system for the detection of IgE antibodies (CAP) in atopic diseases. Arerugi. 40(5):544-454.
7.Lilja G, Kusoffsky E, Johansson SG, Oman H, 1995. Screening of atopic allergy in 5-year-old children--a comparison of the diagnostic properties of Phadiatop Paediatric and Phadiatop. Allergy 50(4):316-321.
8.Yman L, Ewan P, de Groot H, et al. 1996. Clinical efficiency of UniCAP Specific IgE. J Allergy Clin Immuno. 97(1):234.
9.Costongs GM, Bas BM, 1997. The first fully automated allergy analyser UniCAP: comparison with IMMULITE for allergy panel testing. Eur J Clin Chem Clin Biochem 35(11):885-888.
前 言
對於氣喘、過敏性鼻炎、蕁麻疹等等疑似過敏所產生的疾病，首要之務是判定病因是否是由過敏所引起的IgE mediated disease，亦即是要區分病人是否屬於異位性體質(Atopy)。
依據ACAAI ( American Collage of Allergy, Asthma & Immunology) 於2001對Atopy一詞所下的定義：若一個人會在很低劑量的過敏原(通常為蛋白質)刺激下即產生IgE抗體，並且產生諸如氣喘、鼻炎、結膜炎、皮膚炎或蕁麻疹等症狀，即為所謂的Atopy異位性體質。
以往常用以診斷Atopic Disease的工具包括總免疫球蛋白E (Total serum IgE)、皮膚過敏原穿刺試驗(Skin Prick Test，SPT)等等。
總IgE的缺點為與臨床症狀的相關性低，易受各種因素如環境、寄生蟲、藥物等等的干擾，且個人之間的差異相當大，在健康的族群中其濃度分佈往往可以由個位數字至上千kU/L (11,13)，因此用以臨床診斷的準確性僅70%左右(1,3,6)；而皮膚試驗雖然成本低廉，但外在環境的干擾因素太多、操作誤差大、缺乏定量且客觀的測量結果，以及過敏原直接接觸身體，對病患更有相當的風險存在。
以往為了彌補總IgE檢測之不足，有一種方法即是同時檢測總IgE，以及數種疑似病因的過敏原特異性IgE(Anti-allergen Specific IgE)。文獻指出使用此方法做過敏疾病的篩檢，以一次使用15種過敏原的效果最好(1)，但一次檢驗15種過敏原的特異性IgE的成本太高不合效益，且非過敏患者亦需花費15種過敏原檢測的成本，造成醫療資源的浪費。故如何設計一個準確的體外檢驗試劑，能夠以合理的成本提供醫師診斷上的正確參考，一直是一個很重要的課題。
Pharmacia ImmunoCAP檢測原理
瑞典Pharmacia特異性免疫球蛋白試劑及自體免疫抗體試劑在性能及多樣性上均有相當不錯的成績。Pharmacia CAP System所使用的試劑，為十分特別的專利ImmunoCAP設計。一般的ELISA Well是將反應試劑結合在管壁上，故試劑的有效反應表面積並不大，而ImmunoCAP則是將過敏原結合在纖維質構成的海綿狀結構中，利用海綿結構的大表面積，大幅增加過敏原與抗體的結合量，故能有更高的敏感度與更快的反應時間，並且由於纖維質可擠壓的特性，故能更有效地進行清洗的步驟，提高其準確性。與液相(Liquid Phase)的系統相比，固態(Solid Phase)的CAP系統則有較方便的包裝、較簡單的處理過程（不需稀釋，直接上機）以及較佳的穩定性 (9,10) 。
ImmunoCAP的反應原理：當ImmunoCAP表面的過敏原與病人血清中的特異性IgE結合後，洗去未結合的非特異性IgE，之後再加入已被螢光酵素標定的抗IgE抗體。此抗體會與留存在CAP中的特異性IgE結合。洗去未結合的抗IgE抗體後，再加入螢光顯影劑。螢光顯影劑與螢光酵素作用後，量測螢光值。以螢光值來判定特異性IgE的結合量。運用相同的原理，Pharmacia的CAP System中有很多種不同用途的試劑可資運用。其中可以滿足診斷異位性體質以及判別是否為IgE-Mediated Disease之需求的，即為Phadiatop及Phadiatop Infant。
Phadiatop
Phadiatop即是Pharmacia 與Atopy兩字的縮寫，表示此一試劑是特別用以檢測異位性體質Atopy之用。其設計概念為在單一試劑內包含了多種一般常見的吸入性過敏原，只要病患血清中的特異性IgE對這些常見過敏原的任何一種以上有所反應，即會被檢測出來。以此設計相當於一次檢測數十種過敏原，但成本則相對低廉得多。
Phadiatop所使用的IgE Cut-off Value為0.35 kU/L，和總IgE所使用之Cut-off Value (成人150kU/L，兒童依年齡而定)有很大的不同，也不會隨著患者的年齡不同而改變，徒增報告判讀上的困擾。Phadiatop是針對一般性的吸入性過敏原所設計，如Dust Mite、花粉、貓狗之類常見動物之皮毛、黴菌等等。和臨床診斷的結果相比，Phadiatop對呼吸道過敏疾病的專一性和敏感性均在90%上下，故其可完全取代傳統總IgE檢測及皮膚穿刺測試在過敏診斷上的角色，做為第一線的過敏篩檢試劑。
Phadiatop Infant
Phadiatop Infant是Pharmacia CAP System在Phadiatop上市之後數年才推出的產品。由於兒童的過敏進程有所謂的「Allergy March」，亦即一個患有過敏性疾病的嬰兒，在出生後不久常會表現出牛奶等食物過敏的症狀，如腹瀉、腸炎等，且血清中這些食物過敏原的特異性IgE濃度也會偏高；隨年紀增長，則食物特異性IgE會逐漸下降，食物過敏的症狀也會漸漸舒緩，取而代之的則是吸入性過敏原的特異性IgE上昇，以及呼吸道黏膜的過敏症狀出現。
故在四歲以下的嬰幼兒，當有過敏疾病的懷疑時，單獨使用Phadiatop可能會因為此時期病童體內尚未產生抗吸入性過敏原的特異性IgE，故檢測較容易出現偽陰性(7)。以往部分使用者利用Phadiatop合併數種食物特異性IgE檢測來針對嬰幼兒使用，而如今Phadiatop Infant可以達到相同甚至更好的效果。
Phadiatop Infant在設計上大部分沿襲了Phadiatop的配方，所不同之處在於其加入了多種嬰幼兒常見的食物過敏原，例如蛋白、牛奶、大豆、花生、小麥等等，故特別適合用以檢測四歲以下的嬰幼兒是否具有異位性體質。Phadiatop Infant的敏感性約92%，而專一性也有82%左右。
Phadiatop臨床應用
在臨床應用上，凡懷疑症狀為過敏所引起的，例如鼻炎、氣喘、蕁麻疹等，即可視患者年齡進行Phadiatop或Phadiatop Infant檢驗，以判定是否為IgE-mediated之疾病。由於Phdiatop 和Phadiatop Infant的定位為異位性體質的檢測，故其檢驗結果僅為「陽性」或「陰性」的定性檢驗。
當檢驗結果為陰性時，即表示病患不為異位性體質，症狀應該不是受過敏原刺激所引起，此時除施以症狀治療外，亦應考慮病因的其他可能性。而當檢驗結果為陽性時，即表示病患為異位性體質，症狀極有可能是受過敏原刺激所引起。此時除考慮投藥施以症狀治療外，亦可再進一步進行個別的過敏原檢驗，找出可能引起症狀的過敏原，注意加以避免，對病況的改善也大有助益。
結 語
近年來過敏相關疾病大幅增加，在小兒科、婦產科、風免科、胸腔內科、皮膚科、耳鼻喉科及家醫科等等均有數量相當龐大的過敏疾病患者。如何提供病人更好的醫療檢驗品質，協助醫師正確的診斷參考，是我們必須持續努力的目標。在過敏檢驗方面，早期的Skin Prick Test及總IgE檢驗顯然已不能滿足檢驗準確性及安全性的需求，而現今利用Phadiatop及Phadiatop Infant來判定過敏病患的異位性體質，從而協助其找出生活中常遭遇的致病過敏原，一方面可以對症下藥，改善病人的生活品質，一方面又可以減少醫療資源的浪費，相信是過敏檢驗之大勢所趨。
參考文獻
1.Herbert FA, Weimer N, Salkie ML. 1982. RAST and skin test screening in the investigation of asthma. Ann Allergy. 49:311-314.
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3.Gustafsson D, Danielsson D. 1988. In vitro diagnosis of atopic allergy in children. A comparison between total IgE, conventional RAST and a new multi RAST (Phadiatop). Allergy. 43(2):105-108.
4.Wever AM; Wever-Hess J; Kramps JA; Mulder Dzn JD, et al. 1989. The Phadiatop test, a new in-vitro test for inhalation allergy. Ned Tijdschr Geneeskd. 133(2):70-73.
5Dutau G, Bremont F, Hoff M, Nouilhan P, et al. 1990. Detection of respiratory allergies using the Phadiatop test in children 1 to 6 years of age. Ann Pediatr (Paris) 37(6):355-359.
6.Okudaira H, Ito K, Miyamoto T, Wagatsuma Y, et al. 1991. Evaluation of new system for the detection of IgE antibodies (CAP) in atopic diseases. Arerugi. 40(5):544-454.
7.Lilja G, Kusoffsky E, Johansson SG, Oman H, 1995. Screening of atopic allergy in 5-year-old children--a comparison of the diagnostic properties of Phadiatop Paediatric and Phadiatop. Allergy 50(4):316-321.
8.Yman L, Ewan P, de Groot H, et al. 1996. Clinical efficiency of UniCAP Specific IgE. J Allergy Clin Immuno. 97(1):234.
9.Costongs GM, Bas BM, 1997. The first fully automated allergy analyser UniCAP: comparison with IMMULITE for allergy panel testing. Eur J Clin Chem Clin Biochem 35(11):885-888.